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要领一:使用Curve Expert1.4软件(点击下载Curve Expert1.4)
标准曲线的绘制
可以接纳种种绘图软件来绘制ELISA标准曲线,下面以“Curve Expert1.4”软件为例,绘制ELISA标准曲线的要领如下;
1.启动“Curve Expert”
2.X轴输入标准品的OD值(双抗夹心输入OD-空缺值),Y轴输入所对应的浓度值,如图:
3.单击[运行] 按钮,泛起如下对话框
4.单击[ok]按钮,泛起如下两个对话框,关闭下面一个对话框
5. 在对话框的右上角泛起一些曲线的名称,从“1”最先依次点击曲线名称,在右下角会泛起响应拟合的曲线。
(一样平常选择第一个多项式拟合)
6. 凭证拟合的曲线选取ELISA拟合度最佳的曲线双击,泛起如下对话框:
注重:选择系数(即“r”值)最好的曲线方程来举行运算。在下面的对话框
右上角有“r”值 ,当“r”值越靠近1拟合度越好
7.按[Ctrl]键+[L]键,泛起如下对话框:
8.输入标准的OD值,单击[Calculate]按忸,即可获得待测卵白的现实含量(标本稀释了N倍,运算出的数值应在乘以N)。
9. 如想获得ELISA拟合曲线的方程,可在办法6的对话框空缺处右击,选择”Information”
10. 获得如下对话框:点击“Copy”
在你需要的位置粘贴即可获得如下数据:
Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)
Coefficient Data:
a = -21.531017
b = 212.05019
c = -0.24054479
d = 0.018060778
11. 修改作图中X,Y坐标轴高度以及相关属性
选择办法9所示图中的第二排“Graph Properties”,修改好后点击OK生涯
要领二: 使用OriginPro 2021软件盘算竞争法试剂盒ELISA效果
第一步:我们以PG(Progesterone) ELISA Kit 这个试剂盒为例
将标曲的数据复制粘贴在如下表框中
按下Ctrl+A键全选然后鼠标依次单击,Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...
在Function Selection选项卡中,将 Category 参数设置为 Statistics
将Function参数设置为 Logistic
在Find X/Y选项卡中对 Find X from Y 举行勾选,然后单击 Fit 键
横纵坐标选择Log10参数,注重from / to 的上下限值的选择,完成后单击OK 键
最后效果盘算,竞争法由于OD值与样品浓度成反比关系,以是不需要减去零孔配景值,若是是夹心法的试剂盒,则还需要事先在excel中减去配景值然后再依据教程举行盘算。
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